Исключительные достоинства сверхчувствительного ИФА с циклированием Thio-NAD в определении белка NS1 лихорадки денге
15 янв 2024
1. Введение
Лихорадка денге — это острое инфекционное заболевание, вызываемое вирусом денге через укус инфицированного комара вида Aedes (Ae. aegypti или Ae. albopictus), основными симптомами которого являются высокая температура, головокружение, головная боль, сыпь и сильные боли (боль в глазах, мышцах, суставах или костях) и т. д. Это заболевание широко распространено в тропическом и субтропическом климате. По оценкам, ежегодно заражается от 100 до 400 миллионов человек, причем более 80% из них, как правило, протекают в легкой форме и бессимптомно. Тем не менее, тяжелая лихорадка денге может увеличить риск смерти при отсутствии надлежащего лечения. Таким образом, ранняя диагностика данного заболевания имеет большое значение для его своевременного лечения. Следует отметить, что неструктурный белок 1 (NS1), высококонсервативный гликопротеин, в основном секретируется во время инфицирования вирусом Денге, который интенсивно считается основным фактором патогенеза лихорадки Денге. Таким образом, NSI обычно используется в качестве биомаркера для раннего выявления этого заболевания. В данном исследовании для выявления НСИ используется сэндвич-иммуноферментный анализ (ИФА) в сочетании с циклическим методом тионикотинамидадениндинуклеотида (тио-НАД/S-НАД) (далее – ультрачувствительный ИФА) с последующим сравнением с НААТ для подтверждения точности обнаружения.2. Преимущества и недостатки традиционных методов выявления лихорадки денге
В настоящее время существует четыре основных метода выявления лихорадки денге.
Выделение и идентификация вируса обладают высокой специфичностью, но занимают много времени, занимая не менее 5 дней. Экспресс-тест на антиген является самым быстрым и экономичным среди других методов, но чувствительность и специфичность относительно низкие. Серологический тест на основе IgM и IgG ограничен количеством дней заражения, так как тест необходимо отложить до тех пор, пока уровень антител не поднимется до определяемого уровня. В клинике NAAT часто применяют для определения лихорадки денге по грязи высокой чувствительности и специфичности. Однако этот метод является дорогостоящим, трудоемким и подвержен ложноположительным результатам, которые должны проводиться обученным персоналом. Для преодоления недостатков этих методов в данном исследовании применен новый метод выявления ультрачувствительный ИФА.
3. Рабочий процесс сверхчувствительного ИФА с циклированием тио-НАД
Пара антител используется для захвата белка NS1 в сэндвич-ИФА, а щелочная фосфатаза мечется на вторичном антителе. Помимо антител, для построения системы циклирования ферментов тио-НАД используются производное андростерона, 3α-гидроксистероиддегидрогеназа, тио-НАД и НАДН. Во время циклической реакции тио-NAD тио-NADH постоянно накапливается в виде треугольного числа и может быть непосредственно измерен при поглощении 405 нм.
4. Сравнение сверхчувствительных ИФА и NAAT в выявлении белка NS1 лихорадки денге
В NAAT 60 образцов являются денге-положительными, а 25 – денге-отрицательными. Значение циклического порога NAAT (CT) этих образцов с положительным результатом на денге варьировало от 12,42 до 31,41. В сверхчувствительном ИФА 59 образцов соответственно положительны к результатам NAAT, в то время как 25 образцов полностью отрицательны к результатам NAAT. По сравнению с NAAT чувствительность и специфичность сверхчувствительного ИФА составляют 98,3% и 100% соответственно (табл. 2). Из 60 образцов пациентов с подтвержденным NAAT на денге только 1 образец является отрицательным в ультрачувствительном ИФА. Данные NAAT показали, что образец является случаем инфекции DENV 4-го типа со значением CT 21,59. Результаты сверхчувствительного ИФА практически полностью согласуются с результатами NAAT и имеют значение каппа 0,972 (95% ДИ: 0,917-1,0).
5. Заключение
Сверхчувствительный метод ИФА прост в исполнении и не требует профессиональных стажеров для работы. Детектирование может быть начато сразу после получения небольшого образца. Он особенно подходит для раннего выявления лихорадки денге в странах с низким уровнем дохода.Ссылка
Чен, По-Кай и др. «Усовершенствованный метод обнаружения белка Dengue NS1 с использованием сверхчувствительного ИФА с циклированием Thio-NAD». Вирусы, т. 15,9, 1894. 8 сентября 2023 г., doi:10.3390/v15091894Преимущества и особенности продукта BONTAC Thio-NAD/S-NAD
BONTAC является одним из немногих предприятий в Китае, которое может производить Thio-NAD с помощью цельноферментативного метода «Bonzyme» (экологически чистый; без вредных остатков растворителей) и уникальной семиступенчатой технологии очистки «Bonpure». BONTAC объединяет исследования и разработки, производство и продажу, с собственными заводами и рядом международных сертификатов, чтобы обеспечить высокое качество и стабильные поставки продукции.
