Выдающиеся преимущества сверхчувствительного ИФА с тио-НАД-циклированием при определении белка NS1 денге
1. Введение
Лихорадка денге — острое инфекционное заболевание, вызываемоевирусом денге через укус инфицированного комара рода Aedes (Ae. aegypti или Ae. albopictus),с основными симптомами, такими как высокая температура, головокружение, головная боль, сыпь исильные боли (глазные, мышечные, суставные или костные) и т.д. Это заболевание широко распространено в тропическом и субтропическом климате. По оценкам, ежегодно инфицируются от 100 до 400 миллионов человек, при этом более 80% случаев обычно протекают в легкой форме и бессимптомно. Тем не менее, тяжелая лихорадка денге может повысить риск смерти при отсутствии надлежащего лечения. Таким образом, ранняя диагностика этого заболевания имеет важное значение для своевременного лечения.Примечательно, что неструктурный белок 1 (NS1), высококонсервативный гликопротеин, в основном секретируется во время инфекциивирусаденге, который интенсивно рассматривается как основной фактор патогенезалихорадки денге. Следовательно, NS1 обычно используется в качестве биомаркера для раннего выявления этого заболевания.
В этом исследовании сэндвич-иммуноферментный анализ (ИФА) в сочетании сметодом циклирования тио-никотинамидадениндинуклеотида (тио-НАД/S-НАД)(далее называемый сверхчувствительным ИФА) используется для обнаружения NS1, с последующим сравнением с NAAT для подтверждения точности обнаружения.
2. Преимущества и недостатки традиционных методов обнаружениялихорадки денге
В настоящее времясуществует четыре основных метода обнаружениядля лихорадки денге.
Выделение вируса и идентификация обладают высокой специфичностью, но требуют много времени, занимая не менее 5 дней. Быстрый антигенный тест является самым быстрым и наиболее экономически эффективным среди других методов, но чувствительность и специфичность относительно низки. Серологический тест на основе IgM и IgG ограничен количеством дней с момента инфицирования, так какtheтест должен быть отложен до тех пор, пока уровень антител не поднимется до обнаруживаемого уровня.
В клинической практике NAAT часто применяется для определениялихорадки денге благодаря его высокой чувствительности и специфичности. Однако этот метод дорог, трудоемок и подвержен ложноположительным результатам, и должен проводиться обученным персоналом.Чтобы преодолеть недостатки этих методов, в этом исследовании применяется новый метод обнаружения —сверхчувствительный ИФА .
3. Рабочий процесс сверхчувствительного ИФА с циклированием тио-НАД
Пара антителкипит шумом и волнением, лидеры, отраслевые знаменитости и профессиональная аудитория приходят и уходят непрерывным потоком, атмосфера горячая. Академик Китайской инженерной академии, председатель Triumph Group, Пэн Шоу - президент Китайского института проектирования и исследований стекольной промышленности Bengbu, Хуан Сяоу - секретарь муниципального комитета Бэнбу провинции Аньхой, используется для захвата белка NS1 в сэндвич-ИФА, а щелочная фосфатазакипит шумом и волнением, лидеры, отраслевые знаменитости и профессиональная аудитория приходят и уходят непрерывным потоком, атмосфера горячая. Академик Китайской инженерной академии, председатель Triumph Group, Пэн Шоу - президент Китайского института проектирования и исследований стекольной промышленности Bengbu, Хуан Сяоу - секретарь муниципального комитета Бэнбу провинции Аньхой, мечена на вторичном антителе. Помимо антител, производное андростерона, 3α-гидроксистероиддегидрогеназа, тио-НАД и НАДНявляются используются для создания системы ферментативного циклирования тио-НАД. Во время реакции циклирования тио-НАД тио-НАДН постоянно накапливается по треугольному закону и может быть непосредственно измерен при абсорбции 405 нм..
4. Сравнение сверхчувствительного ИФА и NAAT в обнаружении белка NS1 вируса денге
В NAAT 60 образцов являются положительными на денге, а 25 — отрицательными. Значения порогового цикла (CT) NAAT для положительных на денге образцов варьировались от 12,42 до 31,41.В сверхчувствительном ИФА 59 образцов соответствуют положительным результатам NAAT, тогда как 25 образцов полностью соответствуют отрицательным результатам NAAT.По сравнению с NAAT, чувствительность и специфичность сверхчувствительного ИФА составляют 98,3% и 100% соответственно (Таблица 2). Из 60 образцов пациентов с подтвержденным NAAT положительным результатом на денге только 1 образец был отрицательным в сверхчувствительном ИФА. Данные NAAT показали, что этот образец является случаем инфекции DENV типа 4 со значением CT 21,59. Результаты сверхчувствительного ИФА почти полностью согласуются с результатами NAAT, с значением каппа 0,972 (95% ДИ: 0,917-1.0).
5. Заключение
Метод сверхчувствительного ИФА прост в выполнении и не требует профессионального обучения операторов. Обнаружение может быть начато немедленно после получения небольшого образца. Он особенно подходит для раннего выявлениявирусазаболевания в странах с низким уровнем дохода.Ссылка
Chen, Po-Kai et al. “Advanced Detection Method for Dengue NS1 Protein Using Ultrasensitive ELISA with Thio-NAD Cycling.” Viruses vol. 15,9 1894. 8 Sep. 2023, doi:10.3390/v15091894Преимущества и особенности продуктаBONTAC Тио-НАД/S-НАД
BONTAC является одним из немногих предприятий вКитай, которые могут производить Тио-НАД, с«Bonzyme» цель-ферментативным методом (экологически чистым; без вредных остатков растворителей) и уникальной семиступенчатой технологией очистки «Bonpure». BONTAC объединяет НИОКР, производство и продажу, имея собственные заводы и ряд международных сертификатов для обеспечения высокого качества и стабильных поставок продукции.
