Научный метод количественного определения NMN в биологических образцах
17 янв 2024
1. Введение
Добавки никотинамида мононуклеотида (НМН) для повышения уровня никотинамидадениндинуклеотида (НАД+) были признаны многообещающим антивозрастным вмешательством. Тем не менее, точная количественная оценка промежуточных продуктов НАД+, в частности НМН, по-прежнему остается серьезной проблемой. В этом исследовании представлен новый метод, двойная изотопно-опосредованная методология ЖХ-МС/МС (DIMELC-MS/MS) для точного количественного определения NMN в биологических образцах.2. Факторы, влияющие на точное выявление НМН
NMN трудно точно обнаружить из-за его уязвимости к ферментативной деградации, конверсии при обработке проб, его сложного поведения в различных условиях колонны и экстракции, а также матричного эффекта.
В частности, NMN обладает свойствами высокой полярности и низкой летучести, который легко растворяется в воде, но трудно растворяется в органических растворителях. Эти свойства значительно ограничивают применение многих традиционных методов количественного анализа.
Биологические образцы, такие как кровь, несут значительную активность CD38 и CD73 (экто-5'-нуклеотидазы), оба из которых могут использовать NMN в качестве субстрата.
Поведение NMN в колонке очень сложное, вероятно, из-за двудольной природы его зарядов, так что тонкие различия в экстракции и условиях в колонке существенно влияют на надежное и точное обнаружение NMN.
3. Стратегии преодоления dimeLC-MS/MS для снижения влияния импакт-факторов
Во избежание интерференции вышеуказанных факторов применяется опытный образец колонны НМН-2. Эта колонка содержит частицы кремнезема высокой чистоты на основе C18, которые более способны связывать гидрофильные соединения, чем частицы углерода, улучшая способность к разделению.Хлорная кислота (PCA) используется, поскольку она может эффективно извлекать НАД+ и НМН из биологических образцов, таких как плазма, с минимальными потерями.
Для корректировки матричных эффектов фиксированное количество (1 мкМ) каждого изотопного соединения добавляется в биологические образцы перед экстракцией PCA.
4. Преимущества dimeLC-MS/MS
Двойные изотопные стандарты NMN, NMN (M + 14) и NMN (M + 5), в методологии, основанной на ЖХ-МС/МС, позволяют точно проследить судьбу NMN во время обработки образцов, что значительно повышает точность и надежность измерения NMN в биологических образцах. Кроме того, dimeLC-MS/MS может оценивать эффективность экстракции и абсолютные концентрации NMN в различных типах биологических образцов.
5. Заключение
Эта новая методология на основе ЖХ-МС/МС с двойными изотопными стандартами NMN позволяет точно и надежно измерять NMN в биологических образцах. Он может быть использован для будущих исследований по приему NMN.6. Справка
Unno, Junya et al. «Абсолютное количественное определение никотинамидмононуклеотида в биологических образцах с помощью двойной изотопно-опосредованной жидкостной хромато-тандемной масс-спектрометрии (dimeLC-MS/MS)». NPJ AGING vol. 10,1 2. 2 января 2024 г., doi:10.1038/s41514-023-00133-1Почему стоит выбрать BONTAC?
Компания BONTAC является лидером мировой индустрии NMN. У нас есть первая технология цельноферментного катализа в Китае, и мы стали ведущим предприятием по производству коэнзимных продуктов, которые широко используются в индустрии здоровья, медицины и красоты, зеленом сельском хозяйстве, биомедицине и других областях. Примечательно, что BONTAC является поставщиком сырья NMN для знаменитой команды Дэвида Синклера в Гарвардском университете. Наши услуги и продукты заслуживают доверия. Кроме того, BONTAC имеет независимый исследовательский центр технологий коэнзимной инженерии на уровне провинции в Китае и собственные заводы, где можно обеспечить чистоту и стабильность продукции.
