Количественное определение NAD+ и его метаболитов в седалищных нервах мышей

Знакомство

Широко признано, что важнейшие компоненты никотинамидадениндинуклеотида (НАД+) и его метаболитов играют в старении и нейродегенерации. Чтобы стимулировать прогресс в биохимических исследованиях и вмешательствах, направленных на старение и нейродегенеративные заболевания, большое значение имеет точное количественное определение НАД+ и его метаболитов в пути спасения НАД+. В данном случае применяется надежный и точный метод ЖХ-МС/МС для количественной оценки уровня НАД+ и его метаболитов в нормальном и поврежденном седалищном нерве мыши.

Ограничения существующих методов количественного определения НАД+ и его метаболитов

Традиционные методы количественного определения НАД+ и его метаболитов, такие как ВЭЖХ-УФ, ЯМР, электрофорез в капиллярной зоне или колориметрические ферментативные анализы, сталкиваются с различными проблемами чувствительности, селективности и косвенного измерения. Что касается существующих анализов ЖХ-МС/МС для измерения клеточного или тканевого НАД+ и его метаболитов, все еще существует множество трудностей, которые необходимо преодолеть, такие как увеличенное время выполнения, плохая хроматографическая ретенционная способность и неудовлетворительная форма пиков. Более того, только от одного до трех веществ в пути спасения NAD+ могут быть охвачены этими методами.

Модификации метода ЖХ-МС/МС

На основе существующих анализов ЖХ-МС/МС проводятся модификации хроматографических условий, суррогатной матрицы и условий МС/МС. В частности, 5 мкМ метиленфосфоновой кислоты используется в качестве добавки подвижной фазы, которая явно способствует интенсивности сигнала и форме пика. Учитывая относительно чистую и простую природу образцов NEVER и их небольшой размер, сверхчистая вода тестируется в качестве заменителя матрицы. Вместо колонки жидкостной хроматографии с гидрофильным взаимодействием и колонки гиперкарба используется колонка Waters Atlantis Premier BEH C18 AX, уникальная высокопроизводительная технология обработки поверхности которой MaxPeak HPS (пассивация внутренней стенки колонки, устранение металлической поверхности) обеспечивает высокую воспроизводимость, пиковую симметрию и базовое разделение всех аналитов.Кроме того, условия MS оптимизированы для минимизации интерференционного сигнала NAD+ в канале циклической аденозиндифосфатрибозы (cADPR) при сохранении отклика cADPR и мононуклеотида никотинамида (NMN): 4000 В для напряжения ионного распыления, 450 °C для температуры турбонагревателя, 50 фунтов на квадратный дюйм для газа 1, 50 фунтов на квадратный дюйм для газа 2, 30 фунтов на квадратный дюйм для газа завесы и 12 фунтов на квадратный дюйм для ударного газа.

Репрезентативная хроматограмма образцов нервов (в норме и с травмой)

Все пять аналитов достигают исходного разделения, где cADPR является чувствительным биомаркером в модели нейродегенерации. При этом аксотомия седалищного нерва индуцирует дегенерацию аксонов, что приводит к снижению уровня НАД+ и повышенному уровню НМН в поврежденных нервах, что приводит к примерно 2-кратному увеличению соотношения НМН/НАД+. Одновременно уровни никотинамида (NAM) и аденозиндифосфатрибозы (ADPR) снижаются примерно в 2 раза, в то время как уровень cADPR увеличивается более чем в 8 раз. Эти результаты согласуются с результатами ранее опубликованных исследований, подтверждающих точность этого модифицированного метода LS-MS/MS в количественном определении НАД+ и его метаболитов.

Заключение

Этот модифицированный метод ЖХ-МС/МС обеспечивает эффективное базовое разделение НАД+, НМН, НАМ, АДПР и цАДПР в течение короткого времени в 5 минут, что способствует ранней диагностике различных неврологических расстройств и разработке лекарств для лечения старения и нейродегенеративных заболеваний.

Ссылка

Ма И., Денг Л., Ду З. Разработка и валидация метода ЖХ-МС/МС для количественного определения НАД+ и связанных с ним метаболитов в седалищных нервах мышей и его применение к животной модели повреждения нервов. J Chromatogr A. doi:10.1016/j.chroma.2024.464821

БОНТАК НАД

БОНТАК с 2012 года занимается исследованиями и разработками, производством и продажей сырья для коэнзимов и натуральных продуктов, имеет собственные заводы, более 170 мировых патентов, а также сильную команду по исследованиям и разработкам. BONTAC обладает богатым опытом исследований и разработок и передовыми технологиями в области биосинтеза NAD и его предшественники (Например. NMN и NR). Существуют различные типы NAD, которые следует выбирать, включая NAD ER Grade (удаление эндоксина), NAD Grade I (IVD/пищевая добавка/сырой порошок косметики), NAD Grade II (API/промежуточные продукты) и NAD Grade IV (при более высоких требованиях к растворимости), которые могут быть предоставлены в виде лиофилизированного порошка или кристаллического порошка. Чистота BONTAC NAD может достигать более 98%.

Отказ

Данная статья основана на ссылке в научном журнале. Соответствующая информация предоставляется только в целях обмена и обучения и не является медицинской консультацией. Если есть какое-либо нарушение, пожалуйста, свяжитесь с автором для удаления. Мнения, выраженные в данной статье, не отражают позицию BONTAC. Ни при каких обстоятельствах BONTAC не несет никакой ответственности за любые претензии, ущерб, убытки, расходы или затраты, возникшие прямо или косвенно в результате вашего доверия к информации и материалам на этом веб-сайте.